La nueva normativa española para la prevención y control de la legionelosis, obliga no solo al tratamiento de limpieza y desinfección de las instalaciones con riesgo de albergar Legionella, sino también a la realización de análisis de control de la calidad microbiológica y físico-química del agua, con el fin de que no presenten riego para la salud pública. La capacidad de la Legionella de crecer intracelularmente en el interior de otros organismos presentes en el agua, como varias especies de amebas, siendo este uno de los mecanismos que la protegen frente a agentes nocivos externos, tales como tratamientos con cloro o biocidas, junto a sus requerimientos nutritivos, hace que esta sea una bacteria que normalmente se presenta asociada a materias orgánicas y lodos. Así, la Legionella es una bacteria que si bien es difícil de erradicar en las instalaciones donde se acantona y desarrolla distintas formas de resistencia a los tratamientos preventivos, por otro lado también es un género difícil de cultivar en el laboratorio, ya que aquí se presenta como un germen exigente y de lento crecimiento. Esto hace necesario controlar una serie de factores en la toma de muestras para asegurar la validez en los resultados de los ensayos:

1. Presencia de biofilm, lodos, u otros depósitos, donde la bacteria pueda encontrarse en mayor concentración.

2. La presencia de desinfectantes como el cloro u otros biocidas en el agua puede afectar a la viabilidad de las bacterias, que podrían estar anidadas en los restos sólidos acumulados en la instalación y que son puestos en contacto con el agente químico durante la toma de muestra, por ello es importante conocer su presencia, para poder neutralizarlo adecuadamente en el mismo contenedor de recogida.

3. La temperatura del agua ( si fuera > 55ºC) es otro factor que podría llegar a afectar a la viabilidad de Legionella por lo que también se debe controlar en el momento de tomar la muestra.

Preparación Del Material De Toma De Muestra
Material

Para la toma de muestra, según tamaño y accesibilidad de la muestra a recoger, se podrán utilizar distintos tipos de contenedor:

· Bolsas estériles de cierre hermético de 150 cc. Alrededor.

· Botellas asépticas de un solo uso de PP 1000 – 2000 cc.

· Botes de PP o vidrio de 25 cc con boca ancha ( para lodos y limos o muestras muy pequeñas).

· Cuando sea necesario se utilizarán pipeta s Pasteur asépticas, de un solo uso ( Por ejemplo para bandejas poco accesibles de los aparatos de refrigeración, depósitos pequeños como humectadores…).

La forma no neumónica conocida como “Fiebre de Pontiac” (Fraser y cols 1979) que se manifiesta como un síndrome febril agudo y autolimitado. Definición clínica de caso (Memorándum OMS 1990).

· Para mejor llenado de las botellas podrá utilizarse un embudo de PP aséptico.

Muestra en presencia de biocida:

· Si el agua contiene o se cree que pueda contener un biocida oxidante, deberá añadirse un exceso de un agente inactivante al contenedor antes o a la vez que la muestra.

· El cloro y otros agentes oxidantes se inactivan por la adición de tiosulfato potásico o tiosulfato sódico al contenedor. Para otros biocidas todavía no es aplicable la adición de un neutralizante universal.

· Cuando se sospeche o conozca que el agua a recoger ha sido clorada, el cloro se neutralizará añadiendo a estos recipientes 0,1 ml de tiosulfato sódico al 10%, por cada 100 ml de agua recogida.

PLAN DE MUESTREO

Pueden establecerse distintos planes de muestreo según el tamaño y tipo de instalación a controlar.

1. En sistemas con varias salidas de agua susceptibles de aerosolizar, como duchas y grifos de agua sanitaria, riego por aspersión, sistemas anti-incendios, etc.. El técnico destinado a la toma de muestra establecerá un nº mínimo significativo (no inferior a dos puntos por planta) de puntos de salida por sección o planta de la instalación, seleccionando puntos cercanos y alejados de los depósitos. Estos puntos serán rotatorios, no al azar, ya que si la instalación consta de muchos puntos, y debido al coste que supondría aumentar el nº de puntos, se seleccionarán aquellos que tras la inspección visual del técnico resulten mas sospechosos de albergar Legionella, por presentar restos de suciedad, cal o biofilm.

2. En los depósitos grandes (superior a 50 litros): Torres de refrigeración, aljibes, acumuladores… Se recogerá al menos un litro de agua, tomando muestra de los lodos o residuos sólidos que pudiera haber adheridos a las paredes.

3. En depósitos pequeños (inferior a 50 litros) y/o de difícil acceso, como equipos de terapia personal, humidificadores, bandejas de condensadores evaporativos… se tomará la mayor cantidad de muestra posible, observando también la presencia de restos sólidos, suciedad o biofilm, rascando y arrastrando la mayor parte de estos, si existieran, ya que es aquí donde mayor probabilidad hay de encontrar la Legionella.

PROCEDIMIENTOS DE MUESTREO

Según el tipo de instalación a muestrear se utilizarán distintos procedimientos.

Agua de la red:

Elegir habitaciones que no hayan sido utilizadas los días previos a la toma de muestra. Tomar preferentemente agua caliente, procediendo de la forma siguiente:

1. Abrir el grifo o ducha suavemente para recoger los primeros 100 ml (aprox.)

2. Rascar con una torunda de algodón el interior del grifo o ducha e introducir la torunda en el agua.

3. Recoger otra pequeña cantidad de agua ( hasta un máximo de 1 litro) para que arrastre los residuos del rascado.

4. Medir la temperatura en ese punto y anotarla.

5. Medir la concentración de cloro libre y anotar.

Torre de refrigeración:

Tomar la muestra de la parte baja de la torre, junto con los restos de lodo o materia orgánica. Rascar posibles incrustaciones de la pared. Tomar 1 litro de muestra. Medir temperatura del agua y cantidad de cloro libre y anotar.

Depósito de Agua (Caliente o fría):

Tomar la muestra de la parte baja del depósito y si hay materiales sedimentados, recoger parte de estos. Si existen incrustaciones en la pared, rascar parte de ellas sobre la muestra. Recoger 1 litro, medir Tª y cantidad de cloro libre y anotar.

Equipos de terapia personal u otros sistemas generadores de aerosoles:

Tomar las muestras de acuerdo con el tamaño y cantidad de agua del sistema. En aquellos casos en que existan depósitos de corrosión o sedimentos, rascar parte de ellos y diluirlos en la fracción líquida de la muestra.

TRANSPORTE DE MUESTRAS AL LABORATORIO

Como norma los análisis microbiológicos deben comenzar tan pronto como sea posible tras la recepción de la muestra de agua en el laboratorio, preferiblemente en el día de muestreo, particularmente en las muestras que se sabe que contienen biocidas. Pero en cualquier caso se reconoce que el transporte de muestras al laboratorio de análisis puede llevar algún tiempo, particularmente desde lugares alejados. En estos casos se recomienda que el intervalo de tiempo entre la recolección de la muestra y su concentración sea de 2 días, y no debe exceder de 5 días.

Las muestras deben transportarse a menos de 18ºC pero a mas de 10ºC, y deben ser protegidas del calor y la luz del sol. Entregar la muestra en el laboratorio lo antes posible, preferiblemente en el día, pero no más de dos días.

Detalles del origen y volumen de la muestra, tanto como la presencia y naturaleza de cualquier biocida, deben ser anotados y entregados en el laboratorio con las muestras, como datos de apoyo para el análisis.

Tanto por seguridad como por razones analíticas, no es aconsejable el análisis de muestras de origen desconocido o de aguas refrigeradas o tratadas a menos que estas vayan acompañadas de la informaciónadecuada, por lo que es importante rellenar una ficha de solicitud del análisis con los datos de la toma de muestra, done se reflejen el máximo nº de datos de la muestra, como: procedencia, tipo (agua, lodos…), volumen ( en cc), presencia de biocidas, temperatura en el punto de recogida.